抓质量,上水平,创特色
Pay attention to quality, improve level and create characteristics
一、课程基本信息 课程代码:02120109 课程名称:生物化学与分子生物学实验 课程英文名称: Biochemistry & molecular biology experiment 课程所属单位:生物与制药工程系,生物技术教研室 课程面向专业:生物技术专业 课程类型:必修课 先修课程:生物化学、分子生物学 学分:4.5 学时:72应开实验项目个数:16 二、课程性质与目的 《生物化学与分子生物学实验》是在生物技术专业中的一门非常重要的实验性专业基础课。它是在生物化学与分子生物学等课程的基础上而开设的。通过这门课程的学习,希望学生掌握生物化学与分子生物学常用实验的基本原理、基本操作及其应用。通过该门课程的学习,使学生具备一定的科学实验能力,为学生科学素质的培养奠定基础。
三、课程内容与要求 实验一:还原糖的测定(2学时) 基本要求:掌握还原糖测定的基本原理 主要内容:测定还原糖 操作要点:分光光度计操作 主要仪器设备:恒温水浴,分光光度计。
实验二:粗淀粉的测定(1%盐酸旋光法)(2学时) 基本要求:掌握旋光仪的使用,了解旋光法测粗淀粉的基本原理。 主要内容:测定淀粉的含量 操作要点:旋光仪的使用 主要仪器设备:旋光仪、水浴锅
实验三:血糖的测定(2学时) 基本要求:掌握磷钼酸比色法测定血糖的原理及方法,学会制备无蛋白血滤液 主要内容:测定血糖的浓度 操作要点:分光光度计的使用 主要仪器设备:分光光度计;电炉 实验四:脂肪酸值的测定(4学时) 基本要求:掌握测定脂肪酸值的原理和方法,了解测定脂肪酸值的意义 主要内容:测定脂肪酸的酸值 操作要点:滴定操作 主要仪器设备:振荡器,天平 实验五:油脂皂化与皂化值的测定(4学时) 基本要求:掌握测定皂化值的方法 主要内容:测定油脂的皂化值 操作要点:滴定操作 主要仪器设备:球形冷凝管;水浴锅 实验六:血清胆固醇的测定(2学时) 基本要求:胆固醇的测定方法和原理 主要内容:测定胆固醇含量 操作要点:分光光度计操作 主要仪器设备:离心机,分光光度计。 实验七:纸层析法分离鉴定氨基酸(4学时) 基本要求:掌握纸层析的操作技术 主要内容:纸层析分离鉴定氨基酸 操作要点:层析操作 主要仪器设备:层析缸(干燥),喷雾器,毛细管,电吹风,针,线,直尺。 实验八:甲醛滴定法测定氨基氮含量(3学时) 基本要求:掌握甲醛滴定法的原理及方法 主要内容:测定氨基氮含量 操作要点:滴定操作 主要仪器设备:研钵、微量碱式滴定管。 实验九:赖氨酸含量的测定(3学时) 基本要求:掌握分光光度计的使用及测定谷物中赖氨酸的方法 主要内容:测定谷物中赖氨酸 操作要点:分光光度计的使用 主要仪器设备:温水浴、分光光度计。
实验十:蛋白质含量测定——考马斯亮蓝G-250法(2学时) 基本要求:掌握考马斯亮蓝G250染色法测定蛋白质含量的原理和方法 主要内容:测定蛋白质含量 操作要点:分光光度计的使用 主要仪器设备:分光光度计,离心机,分析天平。
实验十一:蛋白质含量测定——微量凯氏定氮法(6学时) 基本要求:掌握凯氏定氮法的原理及凯氏定氮仪的使用。了解凯氏定氮法测定蛋白质含量的优缺点及蛋白质系数的意义 主要内容:微量凯氏定氮法测定蛋白质含量 操作要点:消化、蒸馏、滴定操作 主要仪器设备:全套微量凯氏定氮装置,消化仪。 实验十二:酪蛋白的制备(4学时) 基本要求:掌握从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 主要内容:制备酪蛋白 操作要点:采用离心、抽滤等操作,从牛乳中分离制备酪蛋白 主要仪器设备:离心机,抽滤装置,电炉,温度计,酸度计。 实验十三:pH对酶活性的影响(3学时) 基本要求:掌握测定酶最适pH的方法 主要内容:测定酶的最适pH 操作要点:酶反应过程的控制 主要仪器设备:白滴板,恒温水浴。 实验十四:温度对酶活性的影响(3学时) 基本要求:测定酶最适温度的方法。 主要内容:测定酶的最适温度 操作要点:酶反应过程的控制 主要仪器设备:恒温水浴,可调电炉。 实验十五:血液中转氨酶活力的测定(2学时) 基本要求:掌握转氨酶活力测定的原理和方法。 主要内容:测定转氨酶的活力 操作要点:酶反应过程的控制及分光光度计的操作 主要仪器设备:恒温水浴;分光光度计。 实验十六:羧甲基纤维素酶活力及pH对其活力的影响(6学时) 基本要求: 1.实验前,查找有关资料,熟悉该酶的基本特性、酶活力测定的基本原则与要求,写出实验方案,包括实验原理,试剂的配制方法,实验的每一步骤及目的、要求、时间安排、所需仪器、试剂。 2.按照自己的实验方案,配好相应试剂,准备好相应仪器,进行实验。具体任务是:制作还原糖一吸光度的标准曲线;测定PH对羧甲基纤维素酶活力的影响曲线及该酶的最适pH值;测定固体曲中的羧甲基纤维素酶活力,误差要求小于±10%。 主要内容:制作还原糖-吸光度的标准曲线;测定PH对羧甲基纤维素酶活力的影响曲线及该酶的最适pH值;测定固体曲中的羧甲基纤维素酶活力。 操作要点:设计实验过程,测定酶的活性,确定最适条件。 主要仪器设备:电子天平,分光光度计;恒温水浴锅。 实验十七:DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳(6学时) 基本要求:掌握DNA提取的方法与原理,掌握琼脂糖凝胶电泳的方法与原理。 主要内容:提取DNA,电泳检测。 操作要点:DNA的提取分离过程,电泳操作,紫外观察 主要仪器设备:高速冷冻离心机、低温冰箱、紫外分光光度计、紫外灯、电泳仪、电泳槽、微量加样器。 实验十八:SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(6学时) 基本要求:学习SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,并用于蛋白质分子量的测定。 主要内容:SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量 操作要点:SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及染色观察 主要仪器设备:垂直板电泳槽,电泳仪,染色盘,脱色摇床。 实验十九:凝胶层析法分离蛋白质(6学时) 基本要求:掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和方法 主要内容:凝胶层析法分离蛋白质 操作要点:凝胶层析柱的填装及分离过程 主要仪器设备:层析柱,核酸蛋白检测仪,自动部分收集器。 实验二十:醋酸纤维素薄膜电泳(4学时) 基本要求:掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。 主要内容:醋酸纤维素薄膜电泳测定血清中各种蛋白质的相对百分含量 操作要点:醋酸纤维素薄膜电泳 主要仪器设备:解剖镊子及竹夹子,点样器,直尺,电泳仪及电泳槽,玻璃板(12×12 m),光分光光度计,吹风机,单面刀片。 实验二十一:质粒DNA的提取与酶切(6学时) 基本要求:学习和掌握碱裂解法提取质粒DNA的基本原理,掌握琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的大小。 主要内容:携带质粒E.coli的培养,碱裂解法小量制备质粒,质粒DNA的酶切及电泳检测 操作要点:谨防核酸沉淀同乙醇一起被弃去。 主要仪器设备:高速冷动离心机,台式冷冻离心机,琼脂糖凝胶电泳系统,摇床,凝胶扫描分析系统 实验二十二:PCR基因扩增(6学时) 基本要求:掌握PCR反应的基本原理及实验技术。 主要内容:携带重组质粒(含已知基因序列)E.coli的培养,以菌体为模板进行聚合酶链式反应,PCR产物的电泳检测 操作要点:配制反应液过程中,防止外源DNA污染。 主要仪器设备:摇床,PCR扩增仪,琼脂糖凝胶电泳系统,凝胶扫描分析系统 实验二十三:大肠杆菌感受态细胞的制备与转化(6学时) 基本要求:掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法与技术。 主要内容:大肠杆菌感受态细胞的制备,转化方法 操作要点:感受态的制备过程尽量在低温下(0-4℃)进行。 主要仪器设备:摇床,超净工作台,制冰机,生化培养箱,高速冷动离心机,恒温水浴锅 实验二十四:哺乳动物基因组DNA的提取(6学时) 基本要求:掌握从鼠肝中提取基因组DNA的方法。 主要内容:鼠肝提取基因组DNA,所提取DNA的电泳检测及含量、纯度测定 操作要点:防止DNA酶的污染,防止基因组DNA的机械损伤。 主要仪器设备:高速冷动离心机,台式离心机,制冰机,琼脂糖凝胶电泳系统,凝胶扫描分析系统,分光光度仪 实验二十五:植物基因组DNA的提取(6学时) 基本要求:掌握从植物组织中提取基因组DNA的方法。 主要内容:植物组织基因组DNA的提取,所提取DNA的电泳检测及含量、纯度测定 操作要点:植物组织低温碾磨 主要仪器设备:高速冷动离心机,台式离心机,制冰机,琼脂糖凝胶电泳系统,凝胶扫描分析系统,分光光度仪 四、学时分配(共25个实验项目,从中选择1, 6个实验,共72学时) 实验学时分配表
五、教学方法与教学要求 实验中进行操作指导,实验前要求预习,实验中做好记录,实验报告要按照要求撰写;每组2人进行实验,每次实验安排不超过34人;实验总学时为72学时。 六、课程考核方法 平时操作40分;实验操作考试60分。 七、实验教材与参考资料 《生物化学与分子生物学实验》(自编)
八、说明(如有必要) 执笔人:刘志国、刘军时间:2005-4 |